D-Luciferin, Potassium Salt D-熒光素鉀鹽產(chǎn)品描述

D-熒光素（D-Luciferin）是熒光素酶（Luciferase）的常用底物，普遍用于整個生物技術(shù)領(lǐng)域，特別是體內(nèi)活體成像技術(shù)。其作用機制是在ATP和熒光素酶的作用下，熒光素（底物）能夠被氧化發(fā)光。當(dāng)熒光素過量時，產(chǎn)生的光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān)性（見下圖）。將攜帶熒光素酶編碼基因（Luc）的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入細(xì)胞后，導(dǎo)入研究動物如大小鼠體內(nèi)，之后注入熒光素，通過生物發(fā)光成像技術(shù)（BLI）來檢測光強度變化，從而實時監(jiān)測疾病發(fā)展?fàn)顟B(tài)或藥物的治療功效等。也可以利用ATP對此反應(yīng)體系的影響，根據(jù)生物發(fā)光強度的變化來指示能量或生命體征。

D-Luciferin, Potassium Salt D-熒光素鉀鹽
D-熒光素也常用于體外研究，包括熒光素酶和ATP水平分析；報告基因分析；高通量測序和各種污染檢測。目前市場上有三種產(chǎn)品形式，D-熒光素（游離酸），D-熒光素鈉鹽，以及D-熒光素鉀鹽。這三種產(chǎn)品主要的差別在于溶解特性上。D-熒光素（游離酸）水溶性以及緩沖體系的溶解性都很弱，除非溶于弱堿如NaOH和KOH溶液。溶于甲醇（10 mg/ml）和DMSO（50 mg/ml）。但鈉鹽和鉀鹽形式的D-熒光素能夠非常容易且快速的溶入水或者緩沖液中，使用方便，溶劑無毒性，特別適合體內(nèi)實驗。配成液體后的這三種產(chǎn)品，在絕大多數(shù)的應(yīng)用上都沒有實質(zhì)性的差別。

 產(chǎn)品性質(zhì)

中文別名（Chinese synonym）

D-熒光素鉀鹽；

英文別名（English synonym）

(S)-4,5-Dihydro-2-(6-hydroxy-2-benzothiazolyl)-4-thiazolecarboxylic acid potassium salt; D-Luciferin firefly, potassium salt;

CAS號（CAS NO.）

115144-35-9

分子式（Formula）

C11H7N2O3S2 K

分子量（Molecular weight）

318.42 g/mol

外觀（Appearance）

淡黃色粉末

溶解性（Solubility）

溶于水（60 mg/ml）

純度（Purity）（HPLC）

＞99%

運輸和保存方法

  冰袋運輸。-20℃干燥避光保存。

使用方法

1．體外生物發(fā)光檢測

1）用蒸餾水溶解D-熒光素鉀鹽，配制成100 mM的儲存液（200×，濃度30mg/ml）。混勻后立即使用或分裝于-20℃或-80℃凍存，避免反復(fù)凍融。

2）用預(yù)熱好的組織培養(yǎng)基1:200稀釋儲存液，配制工作液（終濃度150µg/ml）。

3）去除培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)基直至無殘留。

4）待圖像分析前，向細(xì)胞內(nèi)添加1×熒光素工作液，然后進行圖像分析（或者細(xì)胞放在37℃短時間孵育后檢測可增強信號）。

2．    活體成像分析

1）用無菌的DPBS（w/o Mg2+）配制D-熒光素鉀鹽工作液（15mg/ml），0.2µm濾膜過濾除菌。混勻后立即使用或分裝于-20℃或-80℃凍存，避免反復(fù)凍融。一旦使用，放到4℃解凍，保持冰冷且避光。

 2） 注射量取決于注射方式，具體如下：

注射方式

劑量

靜脈注射（25-27gauge針頭）

按10µl/g體重濃度，加入相應(yīng)體積的15mg/ml熒光素工作液

腹腔注射（25-27gauge針頭）

按10µl /g體重濃度，加入相應(yīng)體積的15mg/ml熒光素工作液

肌肉注射（27gauge針頭）

50µl，濃度為1-2mg/ml熒光素工作液

鼻內(nèi)注射（pipette）

50µl，濃度為3mg/ml熒光素工作液

3） 注射入體內(nèi)10-20 min（待光信號達到zui強穩(wěn)定平臺期），再進行成像分析。

注：建議對每只動物模型都需要建立熒光素酶動力學(xué)曲線，從而確定zui高信號檢測時間和信號平臺期。